Duke u bërë me komunën Schizophyllum: Krijoni një kulturë sterile nga kërpudhat e gjetura: 3 hapa (me fotografi)

2024 Autor: John Day | [email protected]. E modifikuara e fundit: 2024-01-30 12:27

Ky udhëzues përqendrohet në shpjegimin se si të krijohet një kulturë sterile e Komunës Schizophyllum (emri i zakonshëm Split Gill kërpudha) në një pjatë petri duke përdorur kërpudha të gjetura. Komuna Schizophyllum është gjetur të ketë mbi 28, 000 gjini, mund të gjendet në të gjitha kontinentet përveç Antarktidës, dhe ka aftësinë (si "kërpudhat e tjera të kalbjes së bardhë dhe kafe") të degradojnë ndotjen ndërprerëse endokrine (plastika, hormonet që imitojnë petrokimikatet industriale si pleh Atrazine, plastifikues Bisphenol-A, ose hormoni sintetik Diethylstilbestrol).

Unë do të kaloj mbi teknikat e identifikimit të kërpudhave të egra, si të gatuaj një pjatë ushqyese agar petri dhe si t'i përdor kërpudhat e gjetura për të rritur një kulturë sterile të izoluar në pjatën tuaj petri. Udhëzime të tjera në këtë seri kalojnë mbi teknika të tilla si identifikimi gjenetik i kërpudhave, analiza të thjeshta enzimatike për të testuar aftësinë e kërpudhave për të prishur plastikën dhe ndotjen e imitimit të hormoneve dhe si të bëni djathë me S. Commune.

Ky projekt doli nga puna bashkëpunuese e Mary Maggic, Paula Pin dhe mua gjatë një qëndrimi në HANGAR në Barcelona Spanjë vjeshtë shtator 2018. Për më shumë informacion në lidhje me projektin lexoni në ~~ ose kaloni të gjithë Bla Bla dhe shkoni direkt në Hap 1 për tutorialin:)

Imazhet janë nga Schizophyllum Commune Fanzine ~ skedarët mund të shkarkohen falas këtu

Gjatë qëndrimit tre qëllimet tona kryesore ishin:

1 ~ Kërkoni dhe tretni literaturën shkencore mbi Komunën Schizophyllum dhe ndërveprimet e saj të ndryshme me hormonet dhe ndotësit petrokimikë që prishin endokrinën. S. Commune është një nga shumë kërpudhat "të kalbura të bardha dhe kafe" me aftësinë për të prishur ndotjen e prishjes hormonale dhe endokrine. Këto kërpudha ushqehen nga pemët duke ekskretuar enzimat "lignocellulosic" nga trupat e tyre të rrjetuar ose "miceli" dhe enzimat janë në gjendje të prishin celulozën dhe linjinën nga të cilat janë bërë pemët. Për shkak të ngjashmërive strukturore midis celulozës, linjinës dhe hormoneve EDS 'si Atrazine, BPA, Estradiol, Diethylstilbestrol dhe Nonylphenols, enzimat "lignocellulosic" të sekretuara nga kërpudhat gjithashtu mund të thyejnë një larmi të gjerë toksikantësh. Përveç kësaj, S. Commune prodhon polisakaride imunostimuluese që janë të dobishme si parandalues dhe trajtime të kancerit (Miratuar në Japoni për trajtimin e kancerit të qafës së mitrës), mund të rrisin vetitë fitoestrogjenike të bimëve të caktuara përmes fermentimit, mund të përdoren në vend të mjegullës dhe laktobacilit në proceset e prodhimit të djathit, dhe prodhojnë enzima tretëse të mpiksjes së trombinës (të dobishme në trajtimin e trombozës). Çuditërisht, të njëjtat "beta-glukanë" që mund të nxirren me ujë të valë si trajtime të kancerit dhe imunostimulantë, përdoren gjithashtu nga industria e naftës për të rritur rendimentet e naftës, duke e lidhur S. Commune në një lak reagimi bizaar me prodhimin e ndërprerës endokrin. petrokimike që është në gjendje të degradojë dhe riparojë.

2 ~ Zhvilloni protokolle DIY dhe DIWO (bëjeni me të tjerët) që thjeshtojnë këto përfitime për të punuar me EQD dhe kërpudhat për të përkthyer njohuritë e kodifikuara shkencore në një gjuhë që është më e arritshme. Përdorni këto mjete për edukim, për pyetje, për rezistencë ndaj kolonizimeve molekulare dhe për të krijuar rrëfime të reja në lidhje me shfaqjen e shumë specieve dhe mutagjenezën tonë kolektive.

3 ~ Sfidoni diskursin dominues cisheteronormativ, queerphobic që rrethon kimikatet që prishin endokrinën (EQD). Për të cituar bursën e Malin Ah-King dhe Eva Hayward për çështjet, "Shumë media të lajmeve po raportojnë këto histori të frikshme endokrine nga oborret tona. Në një përpjekje për të vënë në plan të parë këto çështje-siç do të përshkruajmë në mediat e mëposhtme-ka ndriçuar me gaz një metamorfozë Frankenstein që kërcënon seksin dhe seksualitetin. Në vend që të adresojë shumë rreziqe të tjera shëndetësore të lidhura me ekspozimin toksik, çështjet më të bujshme dhe polemike qëndrojnë për debat dhe përgjigje kritike. Ajo ngre pyetje: Pse seksi është më qendror se kanceri, sëmundje autoimune, dhe madje edhe vdekjen? Cilat nerva kulturore (shumë prej të cilave janë të globalizuara), janë shkaktuar? Dhe, për ata prej nesh me shqetësime feministe, si e riorientojmë debatin larg esencializmit, seksizmit dhe heteronormativitetit? " (Sekset toksike).

Komuna Schizophyllum është një "kërpudhat e kalbjes së bardhë" unike në atë që është gjetur të ketë mbi 28, 000 gjini gjenetike. Ky përshtatje, shumë teorizojnë, ka mundësuar larminë e jashtëzakonshme gjenetike të kësaj specie e cila ekziston në çdo kontinent në të gjithë botën përveç Antarktidës. Ne donim të festonim shumësinë e bukur seksuale të këtij organizmi si një shembull i çuditshmërisë së biologjisë. Diskursi mbizotërues që rrethon EQD-të në media, madje edhe nga aktivistët mjedisorë fokusohet shumë në tregime joshkencore, se këto molekula shkaktojnë seksualitete ose gjini të caktuara që shoqëria jonë i patologjizon, i etiketon si jo normative dhe shpesh kërkon të eliminojë ose shmangë. Jo vetëm që fokusi i panikut seksual, çuditshëm fobik i zemërimit të publikut në lidhje me shkencërisht joreale të EQD (hormonet dhe çrregullimet endokrine nuk i bëjnë njerëzit të çuditshëm ose trans), por po injoron të gjitha efektet shkatërruese reale që mund t'i lidhim me EDC: obezitetin, çrregullime të tiroides, kancere të caktuara, ndër rreziqe të tjera shëndetësore.

Hapi 1: Gjeni Komunën Schizophyllum që jeton në komunitetin tuaj

Kulturat sterile të klasës laboratorike të Komunës Schizophyllum mund të blihen për rreth 350 dollarë nga një bankë e kulturës mikrobiologjike siç është ATCC … kjo është arsyeja pse ne vendosëm të kultivojmë falas nga kërpudhat e egra:)

E kisha të lehtë sepse kisha lexuar për Komunën Schizophyllum dhe rastësisht e vura re që një ditë ajo po rritej në një pemë para banesës sime. Nëse nuk jeni aq me fat që të hasni aksidentalisht në S. Commune në lagjen tuaj, do të dëshironi të shkoni në një zonë të pyllëzuar për të kërkuar kërpudha "kllapa" që rriten në drurë të fortë (pemë që duken sikur nuk po bëjnë shumë mirë) ose pemë të rrëzuara. S. Commune është një nga kërpudhat më të zakonshme ekzistuese në të gjithë botën dhe mund të gjendet në thelb kudo ku ka dru të fortë për t'u rritur.

Mushroomobserver.org siguron një përshkrim të shkëlqyeshëm të hollësishëm se ku dhe kur ka të ngjarë të gjeni S. Commune, si dhe si ta identifikoni atë dhe si të shmangni "duken të ngjashme" që mund të çojnë në identifikim të gabuar:

IDENTIFIKIMI: Komuna Schizophyllum identifikohet lehtësisht nga gushat e saj të ndara, flokët e dendur dhe kapaku në formë tifozi. Kapaku është 1-4.5cm i gjerë dhe zakonisht një formë guaskë ose tifoz me një sipërfaqe gri në të bardhë. Bazidiosporet janë 5-7.5 × 2 -3 mikrometra Një kërpudhë e ngjashme e njohur si “Veshja e Crimped” Plicaturopsis crispa nuk është aq e përhapur.

HABITAT: Komuna Schizophyllum rritet në dru të fortë duke përdorur enzima për të degraduar linjinin dhe shkakton "kalbje të bardhë". Pra, ajo gjendet në shumicën e çdo zone me dru. Mund të gjendet gjatë gjithë vitit për shkak të aftësisë së tij për tu tharë, rihidratuar në kushte më të mira dhe më pas të vazhdojë të sporulojë.

Kjo kërpudhë mund të jetë parazitare në pemët me diametër të vogël që janë nën stres nga faktorë të tjerë, siç është thatësira.

SHIKO NGA: Plicaturopsis crispa ose "Gryka e Crimped" është e ngjashme me Gushën e Splitit. Ajo gjithashtu ka një trup frutor në formë guaske/tifoz. Sidoqoftë, kapaku është një ngjyrë kafe e kuqërremtë ose kafe e verdhë, dhe pjesa e poshtme është shumë e veçantë. Ajo ka venë të thërrmuar si gushë që janë shumë të ndryshme nga gushat e ndara të komunës Schizophyllum. Gryka e Crimped është më pak e zakonshme, por dalluese kur gjendet ".

Hapi 2: Bëni Pllaka Agari Ushqyese për S. Commune për t'u rritur

Për të izoluar një kulturë të S. Commune ju jeni gjetur ju do të duhet disa enët petri mbushur me ushqim për kërpudha. Ekstrakti i maltit Agar është një ushqim i thjeshtë për tu bërë për S. Commune, ose "media ushqyese" që mund të bëhet me përbërës lehtësisht të arritshëm. Alsoshtë gjithashtu një burim i mirë ushqimi për t'u përdorur kur bëni eksperimente të analizës enzimatike me S. Commune dhe kërpudha të tjera të kalbura të bardha ose kafe - ky proces do të mbulohet në një udhëzues tjetër.

SH NOTNIM SIDE: Nëse keni pasur probleme me gjetjen e S. Commune, ka shumë kërpudha të tjera në të njëjtën familje që mund të kultivohen duke përdorur të njëjtat procese dhe janë po aq të mira, nëse jo më të mira në degradimin e ndotësve endokrinë që prishin. Bishti i Turqisë (Trametes Versicolor) është gjetur në shumë studime që kanë parë qindra kërpudha të kalbura të bardha dhe kafe të jenë prodhuesit më të lartë të enzimeve "linjocelulozike" që degradojnë ndotjen petrokimike. Kërpudhat e detit janë gjithashtu shumë të mira në këtë.

Unë bëj punën time mikrobiologjike në një laborator të biologjisë komunitare të quajtur BUGSS (Baltimore Underground Science Space) ku kam qasje në qelqe, peshore dixhitale, cilindra të diplomuar, një autoklavë (për sterilizim të nxehtësisë dhe presionit të mediave), etj. u shfaq në të gjithë botën në dekadën e fundit, kështu që ju mund të dëshironi të kontrolloni këtë listë për të parë nëse ka një pranë jush. Nëse nuk keni një laborator të madh të komunitetit si ky në zonën tuaj, do t'ju duhet të investoni në disa pajisje bazë për këtë proces, siç janë:

1 ~ Një shkallë dixhitale për matjen e saktë të përbërësve tuaj

2 ~ Një tenxhere me presion për të sterilizuar mediumin tuaj me nxehtësi dhe avull

3, Enët Petri, mund të blihen në internet mjaft lirë, qelqi i ripërdorshëm ose plastika e disponueshme do të funksionojnë, por të ripërdorshme është gjithmonë më mirë:)

4 ~ Disa enë qelqi për përzierjen e përbërësve tuaj, sterilizimin dhe ruajtjen.

Nëse nuk doni të investoni në atë pajisje, mund të gjeni pllaka agari të ekstraktit të maltit të para-derdhur për të blerë në faqet e internetit si Amazon-thjesht do të jetë më e shtrenjtë në planin afatgjatë nëse planifikoni të vazhdoni të bëni punë mikrobiologjike.

Tashmë ka shumë udhëzues të shkëlqyeshëm dhe video në youtube se si të bëni gatimet tuaja petri të mediave ushqyese në shtëpi. Pra, në vend që të hyj në detaje të mëdha për këtë, unë thjesht do të lidhem me një çift - dhe do të ofroj recetën për 2% Agar Extract Agar, e cila është media ushqyese që do të përdorni.

Kërpudhat Freshcap: Udhëzues se si të bëni pjata Agar për rritjen e kërpudhave në shtëpi

Mykoweb: Fillimi me Kultivimin e Kërpudhave

Fletë e të Dhënave Teknike të Ekstraktit të Maltit

2% Ekstrakt Malti Agar (MEA) ci Recetë për 1 litër:

20g Ekstrakt Malti (furnizim i zakonshëm për prodhimin e birrës, mund të blihet në internet)

15g Agar (agjent ngurtësues - përdoret për të gatuar shpesh, kështu që mund të blihet në internet ose në disa dyqane ushqimore)

1 litër H20 (Unë zakonisht përdor ujë të kundërt të Osmozës i cili mund të blihet në shumicën e dyqaneve ushqimore në enë galloni)

Kjo recetë mund të modifikohet lehtësisht nëse doni të bëni sasi më të vogla. Unë shpesh bëj vetëm 250 ml në një kohë për shembull, kështu që përfundoj duke përdorur vetëm 5 gram Ekstrakt Malti, 3.75 gram Agar dhe 250 ml ujë.

Hapi 3: Inokuloni gjellën tuaj Petri me kërpudha

Kërpudha që shihni quhet "trupi frytdhënës", është vetëm një pjesë e vogël e organizmit. Pjesa më e madhe e trupit të saj fshihet në pemë (ose në tokë), duke konsumuar drurin. Kjo pjesë e kërpudhave quhet miceli. Për të kultivuar trupin filamentoz, tentakular, rizomatik, të micelit të Komunës Schizophyllum në një pjatë petri, ju do të merrni një mostër të kërcellit, do të sterilizoni dhe vendosni në pjatat tuaja MEA. Myceliumi do të rritet nga mostra e sterilizuar e kërcellit të sterilizuar dhe do të kolonizojë pjatën petri, duke u dukur si një dyshek i bardhë pambuku.

Do t'ju duhet:

• Pllakat e Malt Extract Agar (MEA) që keni përgatitur në hapin e mëparshëm
• 70% alkool izopropil (alkool fërkues) dhe një shishe llak
• Peshqir letre
• Bisturi, ose thjesht një brisk çeliku inox - prestar kuti do të punojë
• piskatore metalike
• doreza
• Një flakë - Unë përdor një llambë alcohaul për sterilizimin e instrumenteve, NonDisjunction ka një udhëzues të shkëlqyeshëm se si ta bëni një këtu.
• Sipërfaqe sterile për tu prerë (sapo kam përdorur një pjatë sterile sterile për këtë)
• Parafilm, një film parafine i përdorur për të vulosur enët petri - ju gjithashtu mund të përdorni vetëm shirit maskues nëse nuk e keni këtë

TEKNIKA STERILE:

Gjëja kryesore që dëshironi të keni parasysh kur përpiqeni të përdorni teknikën sterile është se bakteret dhe sporet bien vazhdimisht në ajër, kështu që ju doni t'i mbani enët tuaja petri të mbuluara sa më shumë që të jetë e mundur. Kur ngrini kapakët për të derdhur media, ose inokuloni, është gjithmonë më mirë të mbani kapakun sipër pjatës, duke ju lejuar të hyni në brendësi horizontalisht, por duke e mbajtur kapakun sipër pjatës për të parandaluar që bakteret të mos hyjnë brenda. Së dyti, ju janë një konglomerat gjigant i organizmave njerëzorë, bakterialë, kërpudhave dhe të tjerë - edhe pse nuk mund ta shihni, ju jeni të rrethuar nga një re e dendur e mikrobeve që po shpërndahen jashtë trupit tuaj. Në vend që të uleni vetëm në sipërfaqen e lëkurës tuaj, mikro-bioma juaj shtrihet në ajër ~~ sooooooo, kurrë mos tundni duart mbi pjatën petri, ose mos u përkulni mbi pjatën e hapur për të parë. Dhe vishni dorashka nëse i ke;)

RREGULLONI HAPACSIN TUAJ T S PUNORS SEM STERILE

Zgjidhni një sipërfaqe pune jo-poroze të pastër nga mbeturinat dhe mbeturinat. Spërkateni zonën me tretësirën tuaj të alkoolit Isopropyl 70% dhe fshijeni atë me një peshqir letre. Vendoseni flakën tuaj në qendër të zonës tuaj të punës dhe ndizeni atë. Ju do të dëshironi të punoni sa më afër flakës, sepse krijon një fushë të vogël sterile rreth saj. Vendosni pllakat tuaja MEA në njërën anë dhe mostrën tuaj të kërpudhave në një sipërfaqe sterile të prerjes në anën tjetër. Unë zakonisht përdor një pjatë sterile sterile si sipërfaqja ime sterile e prerjes, si dhe një pushim mjetesh. Hidhni pak alkool izopropil në një gotë të vogël - do ta përdorni për të sterilizuar tehun dhe piskatoren tuaj gjatë punës.

*¡~ INOKULOJ ~!*

Para se të bëni ndonjë gjë, sterilizoni tehun dhe piskatoren tuaj duke i zhytur në alçën izopropil dhe më pas duke i mbajtur mbi flakë për pak. Pas sterilizimit, vendosini në sipërfaqen tuaj sterile të prerjes nëse i vendosni poshtë. Duke përdorur piskatoret, mbajeni kërcellin e kërpudhave të qetë dhe prerë një copë nga fundi i tij. Merrni këtë copë dhe prerë të gjitha anët në mënyrë që të përfundoni me një kub të vogël të bërthamës së kërcellit të kërpudhave me të gjitha sipërfaqet e jashtme të hequra. Kjo ndihmon për të hequr qafe të gjitha mikrobet e tjera që jetojnë në kërpudha në mënyrë që ata të mos kontaminojnë kulturën tuaj. Pastaj zhytni bërthamën e rrjedhin në izopropil për rreth 30 sekonda, tërhiqeni dhe lëreni të thahet brenda fushës sterile të flakës (mos e përdorni flakën për ta tharë, kjo do të vrasë kërpudhat). Flaka sterilizon piskatoren tuaj përsëri ndërsa prisni që thelbi i kërcellit të thahet. Pastaj thjesht ngrini kapakun e njërës prej pllakave tuaja MEA aq sa të rrëshqisni piskatoren nga ana dhe përdorni piskatoret e sterilizuara për të vendosur bërthamën e rrjedhin në qendër të pjatës. Vuloseni pjatën me parafilm dhe gjatë javëve të ardhshme, duhet të shihni micelin S. Commune që kolonizon pjatën.

Unë zakonisht bëj disa pjata kur punoj me mostra të egra, kështu që nëse infektohem, ka më shumë gjasa të kem të paktën një kulturë të pastër.